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【飛諾美色譜】色譜小知識丨高效液相色譜系統(tǒng)常用的檢測器

高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）檢測器作為高效液相色譜儀的重要組成部分之一，它的作用是將流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號，從而實現(xiàn)定性定量。HPLC檢測器有多種類型，如何正確選擇檢測器很重要。由于樣品組分在流通HPLC系統(tǒng)時會發(fā)生變化，因此選擇哪種檢測器主要取決于樣品及其組成成分的性質，或者流動相和樣品在通過HPLC系統(tǒng)時其組成發(fā)生變化的整體性質。下面咱們就從幾方面來簡單介紹下常用的幾種高效液相色...

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【飛諾美色譜】生物探索 | 不同溫度對單鏈寡核苷酸分析的影響

治療性寡核苷酸的純化及表征是目前制藥行業(yè)的一大熱點。然而，寡核苷酸的表征，特別是通過離子對反相液相色譜（IP-RPLC）進行表征，可能會非常具有挑戰(zhàn)性。治療性寡核苷酸是通過固相合成制造，也就是核苷酸以特定合成步驟進行循環(huán)。因此，我們必須對n-1和n+1等雜質進行表征，這其中可能需要大量的方法開發(fā)步驟來進行優(yōu)化。此外，我們可能還需要對其他密切相關的雜質進行表征和定量，例如硫代磷酸酯的氧化。另一個挑戰(zhàn)是在寡核苷酸分析中可能會觀察到的色譜的變化。保留時間、峰形和峰面積回收率可能在一...

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在色譜寶庫里，挖呀挖呀挖——方法開發(fā)中流動相pH的調節(jié)

【飛諾美色譜】作為微觀世界探索者，色譜工作者有時候像一位運籌帷幄決勝于千里之外的戰(zhàn)略家，有時候又像一位謀士，對微小的“變化”作出嚴謹縝密的判斷。在方法開發(fā)過程中，pH就是分析勝敗的關鍵因素，選擇正確或優(yōu)化的pH值往往是致勝關鍵一步。無論反相、HILIC還是離子交換模式，樣品和流動相的pH值對于您的分析獲得理想結果至關重要。那么，你知道pH的概念是如何產生的嗎？pHpH的概念是丹麥化學家S.P.L.索倫森在1909年提出的?；靖拍睿簆H是水溶性物質的酸度或堿度的量度。更復雜的...

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【飛諾美色譜】色譜小知識丨什么是柱外體積？

柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分，它包括進樣器體積，混合器體積，色譜柱前后連接管路的體積，連接配件等所產生的空間，以及檢測器流通池體積。根據(jù)您使用的系統(tǒng)和應用，在HPLC上開發(fā)超高性能方法需要優(yōu)化上述配件以減少柱外體積。測量柱外體積的方法等度法等度方法的系統(tǒng)體積測量相當簡單，可以直接在系統(tǒng)上進行，而無需更改流動相。首先，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。然后以固定流速啟動HPLC，并在系統(tǒng)中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分，并在270nm或220nm處進行...

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【飛諾美色譜】色譜小知識丨反相高效液相色譜法的優(yōu)勢

高效液相色譜法包括正相色譜和反相色譜兩種，用于分離、定量、鑒定和分析化學或生物樣品的成分。然而，這兩種方法彼此之間有很大的不同，在大多數(shù)情況下反相HPLC是更好的選擇。在正相HPLC中，樣品的分離是通過在固定相中使用親水性基團（容易溶于水或被水吸收）來完成的，使極性成分最后被分離出來。在這種情況下，固定相是極性的，而流動相是非極性的。在反相HPLC中正好相反。首先需要去除極性成分，并且在固定相中使用親脂性基團（可以溶解在脂質、脂肪、油和非極性溶劑中）。在這種情況下，固定相是非...

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