【飛諾美色譜】山楂卷中展青霉素的分析方法

更新時(shí)間：2024-11-26

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本實(shí)驗(yàn)根據(jù)GB 5009.185-2016建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法，采用Cleanert^® PAX結(jié)合高效液相色譜的檢測(cè)方法，對(duì)山楂卷中的展青霉素進(jìn)行了測(cè)定。樣品經(jīng)提取和酶解處理后，用Cleanert^® PAX進(jìn)行凈化，Venusil HLP C18(5 µm，4.6 × 250 mm)色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

結(jié)果表明，當(dāng)展青霉素加標(biāo)量為0.1 mg/kg時(shí)，回收率為105.6%，能夠滿足檢測(cè)要求。

實(shí)驗(yàn)

部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備/耗材

·高效液相色譜儀

試劑材料

·甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純；乙酸、乙酸銨為分析純

·5 mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.38 g乙酸銨，加水溶解并定容至1000 mL

·乙酸溶液：取10 mL乙酸，加入250 mL水中，混勻

·展青霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：乙腈溶解

·果膠酶：10000 U/g

·Cleanert^® PAX，500 mg/6 mL（P/N：AX5006）

實(shí) 驗(yàn)

部分

樣品處理

樣品提取

稱取1 g已均質(zhì)好的山楂卷樣品，加入10 mL水和

75 µL 果膠酶，渦旋混勻1 min，室溫避光放置過夜后，加入10 mL乙酸乙酯，渦旋混合2 min，6000 r/min離心5 min，取上層乙酸乙酯層至100 mL雞心瓶中。剩余水相再加入10 mL乙酸乙酯提取一次，合并兩次乙酸乙酯提取液，在40℃旋蒸至干，以5 mL乙酸溶液溶解殘留物，超聲1 min，待凈化。

樣品凈化

將Cleanert PAX小柱依次用6 mL甲醇，6 mL水

活化平衡，將待凈化液全部轉(zhuǎn)移至小柱上，棄去流出液，再用6 mL乙酸銨溶液，6 mL水淋洗小柱，棄去流出液并抽干小柱15 min。加入8 mL甲醇洗脫，收集流出液置于40℃氮吹至剩余200 ~ 300 µL，用5%乙腈水溶液定容至1 mL，渦旋30 s溶解殘留物，過0.22 µm尼龍針式過濾器過濾，待檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)條件 （色譜條件）

色譜柱：

Venusil HLP C18，5 µm，4.6 × 250 mm；

柱溫：40℃；

流速：1.2 mL/min；

進(jìn)樣量：100 µL；

波長(zhǎng)：276 nm

實(shí)驗(yàn)

部分

結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，采用Cleanert PAX結(jié)合高效液相色譜的方法檢測(cè)山楂卷中展青霉素，加標(biāo)回收率為105.6%，能夠滿足檢測(cè)要求。由圖1 ~ 圖3可知，用Venusil HLP C18檢測(cè)山楂卷的加標(biāo)樣品，分離效果良好。

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實(shí)驗(yàn)討論

本實(shí)驗(yàn)參照國(guó)標(biāo)方法用PAX 150 mg/6 mL做山楂制品中的展青霉素，經(jīng)標(biāo)樣過柱發(fā)現(xiàn)此規(guī)格的小柱使用國(guó)標(biāo)方法，僅能吸附50%的目標(biāo)物，故加大小柱規(guī)格至500 mg/6 mL，回收率能夠滿足檢測(cè)要求。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜檢測(cè)，由于山楂制品的雜質(zhì)較多，普通的C18色譜柱對(duì)雜質(zhì)和目標(biāo)物的分離并不理想，后改用極性嵌合的HLP C18色譜柱，發(fā)現(xiàn)分離度有很大改善，目標(biāo)物能和雜質(zhì)分離。國(guó)標(biāo)方法中建議山楂制品的檢測(cè)儀器為L(zhǎng)C-MS/MS，所以本報(bào)告中的檢測(cè)方法僅供參考。

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了山楂卷中展青霉素的前處理方法，用Cleanert^® PAX結(jié)合高效液相色譜對(duì)加標(biāo)量為0.1 mg/kg的樣品進(jìn)行了測(cè)定，加標(biāo)回收率為105.6%，RSD小于10%，可以滿足檢測(cè)要求，且凈化效果良好，方法穩(wěn)定。說明Cleanert^® PAX可以用于山楂卷中展青霉素的檢測(cè)。

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